پاورپوینت مروری بر روش کرماتوگرافی مایع با کارایی بالا (HPLC)

فرمت فایل: ppt

تعداد اسلاید: 39 اسلاید

قابلیت ویرایش: دارد

تصویری از خود فایل رو میتونید مشاهده کنید.

قسمتی از متن این پاورپوینت که به صورت تصادفی انتخاب شده:

qمهمترین و پرکاربردترین روش جداسازی، روش “کروماتوگرافی” است.

qكروماتوگرافی (Chromatography)، بوسيله گياه‌شناسی روس به نام تسوت، در اوايل قرن بيستم (1903) كشف شد.

• او از اين تكنيك برای جداسازی رنگدانه‌‌های مختلف گياهی مانند كلروفيل‌ها و گزانتوفيل‌ها استفاده کرد.

qروشهای کروماتوگرافی بر پایه دو مفهوم کلی دسته بندی می‌شوند:

• در روش اول، جداسازی بر اساس مفاهیم فیزیکی صورت می‌گیرد.
• این روش شامل دو گروه کروماتوگرافی ستونی (Column) و کروماتوگرافی سطحی است.

q

کرماتوگرافی مایع با کارایی بالا

مفاهیم کلیدی در کروماتوگرافی

qدرتمامی روشهای کروماتوگرافی، جداسازی بر پایه…

• تفاوت مقداری آنالیت (ماده مورد جداسازی) در دو فاز ساکن (Stationary Phase) و متحرک (Mobile Phase) انجام می‌شود.

qاین تفاوت مقدار، منجر به تشکیل تعادلی می‌گردد که آن را با پارامتری به نام ثابت توزیع (K) بیان می‌کنند.

q

q

• Cm نشان دهنده غلظت مولی آنالیت در فازمتحرک است.
• Cs نشان دهنده غلظت مولی آنالیت در فاز ساکن است.

کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا

qسالیانه میلیون‌ها دلار صرف خرید و فروش دستگاههایHPLC  در دنیا می‌شود. q

qعلت این رشد:

• حساسیت بالا
• تعیین مقدار کمی با صحت بالا
• قابلیت آنالیز نمونه‌های غیرفرار و حساس به دما

qاین موارد با تکنیکGC  (کروماتوگرافی گازی) امکان‌پذیر نیستند.

اجزاء و قسمتهای مختلف دستگاه HPLC

qموتور يا پمپ:

• به منظور انتقال حلال و نمونه در فضای نسبتاً طویل ستون نیاز به ایجاد فشاری در سیستم است.
• برای ايجاد فشار حداقل از یک پمپ يا موتور استفاده می‌شود.
• حلال (فاز متحرک) توسط پمپ با سرعت و جریان ثابتی بر فاز ساکن حركت داده می‌شود.
• فشار سیستم به اندازه (سایز) ذرات موجود در ستون، گرانروی (Viscosity) و سرعت جریان فاز متحرک بستگی دارد.

اجزاء و قسمتهای مختلف دستگاه HPLC

qاجزاء نمونه برای تشخیص نوع ماده به سمت آشکار ساز هدایت می‌شوند.

qپس از اتمام کار ستون شستشو داده می‌شود.

• برای شستشو، بسته به نوع ستون، حلال متفاوتی انتخاب می‌شود.
• در ستون‌های غیرقطبی پس از اتمام کار، ابتدا ستون با یک حلال قطبی (معمولاً آب ) و سپس با یک حلال غیرقطبی (معمولاً متانول) شستشو می‌شود.

اطلاعات حاصل از یک کروماتوگرام

qکاربردهای کیفی:

qآنالیز کیفی، برای تشخیص و شناسایی نوع ترکیبات انجام می‌شود.

qزمان بازداری برای هر ماده در یک سیستم و شرایط خاص آزمایشگاهی ثابت و مشخص می‌باشد.

qلذا از زمان بازداری جهت تعیین نوع آنالیت استفاده می‌شود.

• به این منظور کروماتوگرام آنالیت را با کروماتوگرام به دست آمده از استاندارد آن آنالیت مقایسه می‌کنند.
• در صورت یکسان بودن زمان بازداری می‌توان با قطعیت نوع ماده را تعیین کرد.
• مقایسه دو کروماتوگرام تنها در شرایط آزمایشگاهی و دستگاهی کاملاً یکسان معتبر است.

کرماتوگرافی مایع با کارایی بالا